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新一代感受态

特色产品 发布时间:2016/9/21

不需热击,不需复苏的感受态细胞


HIT 感受态细胞 转化 操作规程 产品简介
货号M51010100 M52010100
名称HIT-DH5α HIT-BL21(DE3)
菌株DH5α BL21(DE3)
规格100 μL x 80

转化效率1ⅹ108~5ⅹ108 cfu/μg pUC19

100 μL x 10
5ⅹ106~1ⅹ107 cfu/μg pUC19
M58000150
感受态细胞 -70 ℃储存 6个月 。
名称
基因型
应用
HIT-DH5α
F-,φ80dlacZΔM15, Δ(lacZYA-argF)U169, hsdR17(rk- mk+), recA1, endA1, deoR, λ-
质粒克隆, TA克隆,蓝白斑筛选,筛选重组质粒,cDNA库创建。
HIT-BL21(DE3)
F-, dcm, ompT, hsdS(rB-mB-), gal (DE3)
适用于T7、T7lac 启动子的表达系统; 适用于非毒性蛋白的表达 感受态细胞 感受态细胞 无需热刺激和恢复步骤 无需热刺激和恢复步骤 无需热刺激和恢复步骤 无需热刺激和恢复步骤 无需热刺激和恢复步骤 。
只需简单一步操作, 只需简单一步操作, 只需简单一步操作, 以内完成转化,并达到高效率。 以内完成转化,并达到高效率。 以内完成转化,并达到高效率。 以内完成转化,并达到高效率。 以内完成转化,并达到高效率。 以内完成转化,并达到高效率。 HIT转化步骤
注意:转化前请将 平板培养基与玻璃 珠干燥预热到 37 ℃。
1) 准备好冰浴, 准备好冰浴, 准备好冰浴, 37 ℃平板培养基与玻璃 ℃平板培养基与玻璃 ℃平板培养基与玻璃 ℃平板培养基与玻璃 珠。从 -70 ℃冰箱取出感受态细胞置于 ℃冰箱取出感受态细胞置于 ℃冰箱取出感受态细胞置于 ℃冰箱取出感受态细胞置于 ℃冰箱取出感受态细胞置于
室温自来水下或浴 室温自来水下或浴 室温自来水下或浴 室温自来水下或浴 中 10 -20 秒,至解冻 秒,至解冻 秒,至解冻 1/31/31/3。
2) 加入待转化的 加入待转化的 加入待转化的 DNA DNA (其中 DNA 体积不应超过感受态细胞的 体积不应超过感受态细胞的 体积不应超过感受态细胞的 体积不应超过感受态细胞的 体积不应超过感受态细胞的 体积不应超过感受态细胞的 体积不应超过感受态细胞的 1/101/101/101/10, 即 < 10 μL)。漩涡振荡 。漩涡振荡 。漩涡振荡 EP 管 1秒,混匀内容物。 秒,混匀内容物。 秒,混匀内容物。 秒,混匀内容物。
3) 冰浴中静置 冰浴中静置 冰浴中静置 1-10 分钟(建议可以静置 分钟(建议可以静置 分钟(建议可以静置 分钟(建议可以静置 分钟(建议可以静置 分钟(建议可以静置 5分钟)。 分钟)。 分钟)。
4) 准备好的 准备好的 37 ℃干燥平板培养基 ℃干燥平板培养基 ℃干燥平板培养基 ℃干燥平板培养基 (含相应抗生素的 含相应抗生素的 含相应抗生素的 含相应抗生素的 SOCSOC 或 LB 固体琼脂培养基 固体琼脂培养基 固体琼脂培养基 固体琼脂培养基 等)上加入 10 -20 粒 ViVaCell ViVaCellViVaCell ViVaCell涂布玻璃珠 玻璃珠 (货号 (货号 : M580001: M580001: M580001 : M580001: M580001: M580001: M580001: M58000150), 用枪将 用枪将 EP 管 中菌液 转移至平板上。晃动来回滚珠子, 然后改变方向再几次转移至平板上。晃动来回滚珠子, 然后改变方向再几次转移至平板上。晃动来回滚珠子, 然后改变方向再几次以确保菌液均匀涂布在培养基表面。当的琼脂开始干燥( 以确保菌液均匀涂布在培养基表面。当的琼脂开始干燥( 以确保菌液均匀涂布在培养基表面。当的琼脂开始干燥( 以确保菌液均匀涂布在培养基表面。当的琼脂开始干燥( 以确保菌液均匀涂布在培养基表面。当的琼脂开始干燥( 以确保菌液均匀涂布在培养基表面。当的琼脂开始干燥( 以确保菌液均匀涂布在培养基表面。当的琼脂开始干燥( 以确保菌液均匀涂布在培养基表面。当的琼脂开始干燥( 以确保菌液均匀涂布在培养基表面。当的琼脂开始干燥( 以确保菌液均匀涂布在培养基表面。当的琼脂开始干燥( 以确保菌液均匀涂布在培养基表面。当的琼脂开始干燥( 以确保菌液均匀涂布在培养基表面。当的琼脂开始干燥( 20 -40 秒)倒 秒)倒 出玻璃珠,准备孵育 出玻璃珠,准备孵育 出玻璃珠,准备孵育 出玻璃珠,准备孵育 。
5) 平板置于 平板置于 37 ℃培养 ℃培养 16 -18 18 18 小时,观察转化克隆的增长 小时,观察转化克隆的增长 小时,观察转化克隆的增长 小时,观察转化克隆的增长 小时,观察转化克隆的增长 小时,观察转化克隆的增长 。
注意事项
当1/3体积的感受态细胞解冻时,效率最好;
漩涡振荡1s不会影响效率;
对于较大质粒(>6 kb)与cDNA库操作步骤(上述步骤3改为): 冰浴20min,然后42℃水浴1min,再冰浴20min,将有助于提高转化效率;
建议培养皿与涂布玻璃珠预热至37℃,使用4℃或室温平板时,效率会降低;
抗生素的浓度建议如下: Ampicillin (50 mg/ml) ; Kanamycin (25 mg/ml) ; Tetracycline (12.5 mg/ml),浓度过高会降低转化效率,浓度过低会增生卫星菌落。
HIT-DH5α: 37℃孵育时间超过18-24小时时将会增生卫星菌落。